Sawl ensymau a ddefnyddir yn gyffredin mewn arbrofion PCR

Adwaith cadwyn polymeras, wedi'i dalfyrru felPCRyn Saesneg, yn dechneg bioleg moleciwlaidd a ddefnyddir i chwyddo darnau DNA penodol.Gellir ei ystyried yn ddyblygiad DNA arbennig y tu allan i'r corff, a all gynyddu swm bach iawn o DNA yn fawr.Yn ystod y cyfanPCRproses adwaith, mae un dosbarth o sylweddau yn chwarae rhan hanfodol - ensymau.

1. Taq DNA

Mewn arbrofion yn nyddiau cynnarPCR, defnyddiodd gwyddonwyr Escherichia coli DNA polymerase I, Ond mae problem gyda'r ensym hwn: mae angen iddo ailgyflenwi ensym newydd bob tro y mae cylch yn cael ei berfformio, sy'n gwneud y camau gweithredu ychydig yn gymhleth ac mae'n anodd ymhelaethu'n llwyr yn awtomatig.Cafodd y broblem hon ei datrys ar ôl i wyddonwyr ynysu Taq DNA polymerase o Thermus aquaticus yn ddamweiniol ym 1988. Ers hynny, mae ymhelaethu awtomatig ar DNA wedi dod yn realiti.Mae darganfod yr ensym hwn hefyd yn gwneudPCRtechnoleg technoleg gyfleus, ymarferol a chyffredinol.Ar hyn o bryd, taq DNA polymeras yw'r polymeras mwyaf cyffredin mewn citiau DNA.

2. PfuDNA

Fel y soniwyd uchod, mae gan Taq DNase nam mawr, felly mae gwyddonwyr wedi addasu Taq DNA polymeras i raddau er mwyn osgoi ymhelaethu amhenodol oherwydd diffyg cyfatebiaeth, gan arwain at ganlyniadau profion anghywir.Ond gall addasu polymeras DNA Taq atal gweithgaredd DNA polymeras ar dymheredd ystafell.Gall polymeras PfuDNA wneud iawn am yr anfanteision uchod o Taq DNA polymerase, fel y gellir cynnal yr adwaith PCR fel arfer, a gellir gwella cyfradd llwyddiant ymhelaethu genynnau targed yn effeithiol.

3. Reverse Transcriptase

Darganfuwyd trawsgrifiad gwrthdro ym 1970. Mae'r ensym hwn yn defnyddio RNA fel templed, dNTP fel swbstrad, yn dilyn yr egwyddor o baru basau, ac yn syntheseiddio llinyn sengl DNA sy'n ategu'r templed RNA i'r cyfeiriad 5′-3′.Mae transcriptase gwrthdro yn dibynnu'n bennaf ar weithgaredd DNA polymeras o dempledi DNA neu RNA ac felly nid oes ganddo unrhyw weithgaredd exonuclease 3′-5′.Fodd bynnag, mae ganddo weithgaredd RNase H, sy'n cyfyngu hyd synthesis trawsgrifiad gwrthdro i raddau.Oherwydd ffyddlondeb isel a thermosefydlogrwydd trawsgrifiad cefn gwyllt, fe wnaeth gwyddonwyr ei addasu hefyd.

CanysPCRarbrofion, y prif nwyddau traul yw: tiwb PCR unigol, tiwb PCR 4/8-stribed, platiau PCR.

Labio'sNwyddau traul PCRcael y canlynolmanteision:

platiau PCR: Cysondeb cylchredwr thermol eang;Cyferbyniad uchel, hawdd adnabod yn dda;adlewyrchiad fflworoleuedd yn dda; datrosglwyddo gwres;DNase ardystiedig, RNase, DNA, atalyddion PCR, a phrofi heb pyrogen.

Tiwbiau PCR unigol: Anweddiad-gwrthsefyll; datrosglwyddo gwres;eglurder optegol rhagorol; DNase ardystiedig, RNase, DNA, atalyddion PCR, a di-byrogen wedi'i brofi.

Tiwbiau PCR 4/8-stribedi: Waliau tenau iawn; eglurder uchel; adlewyrchiad fflworoleuedd da;gellir ei ddefnyddio mewn diwydiant fferyllol, diwydiant bwyd, a bioleg moleciwlaidd; deunydd PP crai o ansawdd uchel; DNase ardystiedig, RNase, DNA, atalyddion PCR, a di-byrogen wedi'i brofi.