Defnydd a rhagofalon tiwb centrifuge ultrafiltration
1) Dewiswch tiwb ultrafiltration addas.Sylwch fod pilenni UF yn wahanol yn eu lefel goddefgarwch i gemegau amrywiol.Yn nodweddiadol, gellir dewis tiwbiau ultrafiltration sydd â thoriad pwysau moleciwlaidd o 10 kDa gyda thoriad pwysau moleciwlaidd na ddylai fod yn fwy nag 1/3 o bwysau moleciwlaidd y protein o ddiddordeb, megis 35 kDa.Os yw pwysau moleciwlaidd y protein o ddiddordeb tua 10 kd, gellir defnyddio tiwb uwch-hidlo gyda thoriad pwysau moleciwlaidd o 3 KD.
(2) Mae'r ultrafiltration, wedi'i brynu'n ffres, yn sych, gyda dŵr ultrapure wedi'i ychwanegu cyn ei ddefnyddio a dŵr yn pasio'n gyfan gwbl drwy'r bilen, y baddon iâ neu'r oergell wedi'i oeri ymlaen llaw am ychydig funudau.Yna mae'r dŵr yn cael ei arllwys i ffwrdd, hy yr hylif protein, a faint sy'n cael ei ychwanegu, p'un bynnag nad yw'n fwy na'r llinell wen ar frig y tiwb.Mae'r llawdriniaeth yn ysgafn, ac mae angen i'r tiwb ultrafiltration gael ei oeri ymlaen llaw ar rew cyn ychwanegu'r hydoddiant protein.
3) Roedd màs a chanol y disgyrchiant i gyrraedd y cydbwysedd.Sylwch nad yw'r cyflymder cylchdro a'r cyflymiad yn gyflym iawn, fel arall yn niweidio'r bilen ultrafiltration yn uniongyrchol.Dechreuwyd hidlo allgyrchol (allgyrchydd wedi'i oeri ymlaen llaw i 4 gradd).Ar ôl i RPM gwahanol allgyrchyddion gael ei drawsnewid i g, roedd yn wahanol.Addaswyd cyflymiad y centrifuge i'r lleiafswm, gan leihau'r pwysau ar y bilen.Sylwch, gwnewch yn siŵr eich bod yn gadael y centrifuge ar ôl i'r centrifuge gyrraedd ei gyflymder cyrchfan, neu os oes gennych broblem, ni allwch ei drin am y tro cyntaf.Addaswyd cyfeiriadedd y bilen i'r gwerthyd yn unol â'r cyfarwyddiadau (mae achos centrifuge onglog yn bilen i echelin berpendicwlar).Mewn defnydd ymarferol, mae'r cyflymder cylchdroi cyffredinol yn is na'r hyn yn y cyfarwyddiadau, fel y gellir ymestyn bywyd y tiwb centrifuge.
3) Roedd màs a chanol y disgyrchiant i gyrraedd y cydbwysedd.Sylwch nad yw'r cyflymder cylchdro a'r cyflymiad yn gyflym iawn, fel arall yn niweidio'r bilen ultrafiltration yn uniongyrchol.Dechreuwyd hidlo allgyrchol (allgyrchydd wedi'i oeri ymlaen llaw i 4 gradd).Ar ôl i RPM gwahanol allgyrchyddion gael ei drawsnewid i g, roedd yn wahanol.Addaswyd cyflymiad y centrifuge i'r lleiafswm, gan leihau'r pwysau ar y bilen.Sylwch, gwnewch yn siŵr eich bod yn gadael y centrifuge ar ôl i'r centrifuge gyrraedd ei gyflymder cyrchfan, neu os oes gennych broblem, ni allwch ei drin am y tro cyntaf.Addaswyd cyfeiriadedd y bilen i'r gwerthyd yn unol â'r cyfarwyddiadau (mae achos centrifuge onglog yn bilen i echelin berpendicwlar).Mewn defnydd ymarferol, mae'r cyflymder cylchdroi cyffredinol yn is na'r hyn yn y cyfarwyddiadau, fel y gellir ymestyn bywyd y tiwb centrifuge.
(4) Pan fyddwch wedi'i grynhoi i'r 1ml sy'n weddill, cymerwch 50ul o doddiant byffer, ychwanegwch 10ul o'r llif trwodd i weld a oes unrhyw liw glas, i benderfynu a yw'r tiwb ultrafiltration yn ddiffyg protein.Os yw'r tiwb yn gollwng, ail-arllwyswch yr haen uchaf a'i llifo i mewn i diwb newydd i ddechrau hidlo traul.I benderfynu yn union a gafodd tiwbiau eu methu, allgyrchwch am 10 munud gyda 5mgml o BSA cyn llifo drwodd, rhedeg ar lud protein, neu assay crai Bradford, a pharhau trwy ychwanegu'r hydoddiant protein crynodedig sy'n weddill (sy'n gweithredu ar rew ac yn atal proteinau rhag gwresogi) hyd nes mae'r cyfan o'r dwysfwyd wedi'i ychwanegu.Byddwch yn ofalus wrth allgyrchu os bydd proteinau'n cael eu dyddodi, gan arwain at gau'r tiwb.Os bydd dyddodiad yn digwydd, penderfynwch ai crynodiad gormodol o brotein neu glustogfa amhriodol yw achos penodol dyddodiad;Gellir datrys y cyntaf trwy ultrafiltration o diwbiau ultrafiltration lluosog ar yr un pryd, gan leihau'r crynodiad, a'r olaf trwy gyfnewid gwahanol doddiannau byffer nes nad oes dyddodiad o'r protein yn digwydd.
(4) Pan fyddwch wedi'i grynhoi i'r 1ml sy'n weddill, cymerwch 50ul o doddiant byffer, ychwanegwch 10ul o'r llif trwodd i weld a oes unrhyw liw glas, i benderfynu a yw'r tiwb ultrafiltration yn ddiffyg protein.Os yw'r tiwb yn gollwng, ail-arllwyswch yr haen uchaf a'i llifo i mewn i diwb newydd i ddechrau hidlo traul.I benderfynu yn union a gafodd tiwbiau eu methu, allgyrchwch am 10 munud gyda 5mgml o BSA cyn llifo drwodd, rhedeg ar lud protein, neu assay crai Bradford, a pharhau trwy ychwanegu'r hydoddiant protein crynodedig sy'n weddill (sy'n gweithredu ar rew ac yn atal proteinau rhag gwresogi) hyd nes mae'r cyfan o'r dwysfwyd wedi'i ychwanegu.Byddwch yn ofalus wrth allgyrchu os bydd proteinau'n cael eu dyddodi, gan arwain at gau'r tiwb.Os bydd dyddodiad yn digwydd, penderfynwch ai crynodiad gormodol o brotein neu glustogfa amhriodol yw achos penodol dyddodiad;Gellir datrys y cyntaf trwy ultrafiltration o diwbiau ultrafiltration lluosog ar yr un pryd, gan leihau'r crynodiad, a'r olaf trwy gyfnewid gwahanol doddiannau byffer nes nad oes dyddodiad o'r protein yn digwydd.
(5) Mae'r ychydig gamau cyntaf yn cael eu defnyddio i grynhoi'r protein, ac os yw'r byffer i'w newid, ychwanegwch glustog newydd (ultrafiltration trwy bilen ultrafiltration 0.22um) yn ysgafn i tua 1ml o gyfanswm y protein, a'i ail-grynhoi i tua 1ml am dri amseroedd yn olynol, gyda'r cyfaint terfynol cryno terfynol yn dibynnu ar y crynodiad protein a ddymunir, yn gyffredinol nid yn fwy na 500ul, ond hefyd o fewn 200ul.Cyflawni 1000 × neu fwy ar dri achlysur, yn y bôn cymaint o newid byffer, fel y'i cyfrifir gan o leiaf 10 × neu fwy o gyfoethogi cyfaint bob tro.
(5) Mae'r ychydig gamau cyntaf yn cael eu defnyddio i grynhoi'r protein, ac os yw'r byffer i'w newid, ychwanegwch glustog newydd (ultrafiltration trwy bilen ultrafiltration 0.22um) yn ysgafn i tua 1ml o gyfanswm y protein, a'i ail-grynhoi i tua 1ml am dri amseroedd yn olynol, gyda'r cyfaint terfynol cryno terfynol yn dibynnu ar y crynodiad protein a ddymunir, yn gyffredinol nid yn fwy na 500ul, ond hefyd o fewn 200ul.Cyflawni 1000 × neu fwy ar dri achlysur, yn y bôn cymaint o newid byffer, fel y'i cyfrifir gan o leiaf 10 × neu fwy o gyfoethogi cyfaint bob tro.
Amser postio: Nov-09-2022